取60 mL牛血清，攪拌滴加醋酸鈉溶液，調節pH至4.5；滴加正辛酸溶液，常溫攪拌均勻后，4 ℃放置1 h；12000 r/min離心30 min，上清經濾紙過濾后，加入1/10體積的10×PBS，調節pH至7.0，攪拌滴加飽和硫酸銨溶液至50%，4 ℃放置2 h，12000 r/min離心30 min，去上清；PBS重懸離心后的沉淀物，4 ℃透析，每2 h更換一次透析液，直至完全去除氨離子；檢測蛋白濃度，凍存，備用。
2.2兔抗牛IgG抗體的制備
用制備好的牛IgG抗原每2周免疫1次大耳白兔，經4次免疫后，取耳緣靜脈血進行酶聯免疫吸附實驗檢測抗體效價，效價達到10萬后停止免疫，進行頸動脈采血。將兔血經5000 r/min，4 ℃離心15 min后收集上層血清。提取抗體，提取方法同牛IgG提取方法。測定抗體效價及濃度，凍存，備用。
